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人(Human)α-生育酚 (α-Tocopherol)ELISA檢測試劑盒使用說明
點擊次數:1484      發布時間:2013-07-26

中文說明書 UNIONHONEST
酶聯免疫吸附測試 Enzyme Linked Immunosorbent Assay
人 (Human) α-生育酚 (α-Tocopherol) ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿
試驗原理:

α-Tocopherol試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知α-Tocopherol濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將α-Tocopherol和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中α-Tocopherol的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制

試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品:800mg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀
空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
生物素標記的抗α-Tocopherol抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
標本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型

自備材料
1.蒸餾水。
2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3.振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,2.請盡快用水沖洗。
3.實驗中不4.要吃喝、抽煙或使用化妝品。
5.不6.要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

ELISA 檢測試劑盒操作注意事項
1.試劑應按標2.簽說明書儲存,3.使用前恢復4.到室溫。稀稀過后的標5.準品應丟棄,6.不7.可保存。
8.實驗中不9.用的板條應立即放回包裝袋中,10.密封保存,11.以免變質。
12.不13.用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同14.批號的試劑不15.要混用。保質前使用。
16.使用一次性的吸頭以免交叉污染,17.吸取終止液和底物A、B液時,18.避免使用帶金屬部分的加樣器。
19.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
20.洗滌酶標21.板時應充分拍干,22.不23.要將吸水紙直接放入酶標24.反應孔中吸水。
25.底物A應揮發,26.避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,27.避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,28.有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
29.加入試劑的順序應一致,30.以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
31.按照說明書中標32.明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不2、含熱原和內毒素的試管。收集血液后,3、1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
4、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
5、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
6、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,7、取上清液
8、保存------如果樣品不9、立即使用,10、應將其分成小部分-70 ℃保存,11、避免反復12、冷凍。盡可能的不13、要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,14、檢測前先離心或過濾。不15、要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
1.標2.準品:標3.準品的系列稀釋應在實驗時準備,4.不5.能儲存。稀釋前將標6.準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

800 mg/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 mg/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 mg/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 mg/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 mg/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 mg/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 mg/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

7.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍8.稀釋。


操作步驟
1.使用前,2.將所有試劑充分混勻。不3.要使液體產生大量的泡沫,4.以免加樣時加入大量的氣泡,5.產生加樣上的誤差。
6.根據待測樣品數量加上標7.準品的數量決定所需的板條數。每個標8.準品和空白孔建議做復9.孔。每個樣品根據自己的數量來定,10.能使用復11.孔的盡量做復12.孔。標13.本用標14.本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
15.加入稀釋好后的標16.準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標17.記的抗體。蓋上膜板,18.輕輕振蕩混勻,19.37℃溫育1小時。
20.甩去孔內液體,21.每孔加滿洗滌液,22.振蕩30秒,23.甩去洗滌液,24.用吸水紙拍干。重復25.此操作3次。如果用洗板機洗滌,26.洗滌次數增加一次。
27.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,28.輕輕振蕩混勻,29.37℃溫育30分鐘。
30.甩去孔內液體,31.每孔加滿洗滌液,32.振蕩30秒,33.甩去洗滌液,34.用吸水紙拍干。重復35.此操作3次。如果用洗板機洗滌,36.洗滌次數增加一次。
37.每孔加入底物A、B各50ul,38.輕輕振蕩混勻,39.37℃溫育10分鐘。避免光照。
40.取出酶標41.板,42.迅速加入50ul終止液,43.加入終止液后應立即測定結果。
44.在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

標準品濃度(mg/ml)
A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品


局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

ELISA 檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的α-Tocopherol標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的α-Tocopherol含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-800mg/ml

4、敏感度: 1.0 mg/ml 

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