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ELISA試劑盒檢測結果分析方法
點擊次數:74      發布時間:2021-12-09

任何場景細節決定成敗,這對于實驗室科研工作者來說也是如此。在ELISA試劑盒實驗中的各項操作細節有很多,如盡量少用排槍、勤換槍頭,加樣時由低濃度向高濃度加,因為這樣可以減少跳孔的幾率。而整個實驗的尤其關鍵就是結果的處理方法了,那么在在今天的技術文章中,上海研域生物為您帶來的是ELISA試劑盒檢測結果分析方法。


1:ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度標準品的平均OD值,復孔的變異系數應該小于20%。

2:平均OD值減去空白孔的OD值。

3:制作標準曲線。


ELISA實驗


以減去本底后的OD值為X軸,標準品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數、對數、四參數方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數據吻合,可以將標準品的濃度作為未知數,將對應的OD值帶入該方程,計算出標準品的濃度,得到的結果應該與實際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。


ELISA試劑盒實驗如果出現標準曲線的線性不好,或平行性不好(雙孔對照孔的OD值差別很大),或出現跳孔的現象,可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發、酶標板孔問加入的試劑量不同,相對應的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中,人工洗板時也請小心,勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入,切記勿將槍頭接觸到板孔內,吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、確認孵育環境不透光,蓋板膜將酶標板密封好、使用已校正過的微量加樣器,如將一次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下,那么將以后槍頭上留有的液體也滴下,以保證加入液體體積的一致性。


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