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胎牛血清白蛋白如何提取
點擊次數:115      發布時間:2021-11-19

胎牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的一種白蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應緩沖液中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環境因素如加熱,表面張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白,一般獲取胎牛血清白蛋白,常常運用的方法是加熱法。

下面一起和上海研域生物來看看是怎樣獲取胎牛血清白蛋白的!

ELISA實驗

一、所需材料

胎牛血清取近郊屠宰場,以檸檬酸三鈉為抗凝劑,血液搜集后隨即分別出血漿備用。需要的試劑有血清白蛋白;溴jia酚氯;醋酸纖維素薄膜,別的試劑均為分析純。獲取胎牛血清白蛋白需要準備 LG-6型大容量冷凍離心機,DF-C型電泳儀,UV-754型紫外可見分光光度計,PHS-2型酸度計。

二、具體方法

白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法,以胎牛血清白蛋白為規范. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質溶液在波長為403 nm處的光吸收值,然后折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表明。

胎牛血清白蛋白的生產工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿,加一定量的蒸餾水稀釋,再參與恰當的穩定劑和蛋白沉淀劑,然后按下述方法進行試驗處理:

1.不一樣pH值溶液對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件固定的情況下,試驗不一樣pH值對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。

2.不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下,試驗不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。

3.不一樣稀釋倍數對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下,試驗不一樣稀釋倍數對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。

4.不一樣加熱溫度對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件選定的情況下,試驗不一樣加熱溫度對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。


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