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ELISA試劑盒樣本影響因素有哪些
點擊次數:160      發布時間:2021-11-11

ELISA即酶聯免疫吸附法,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法簡單,方便,靈敏,特異性強且不需要特殊設備(只需要酶標儀就可以),所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。

但是影響ELISA測定的因素有很多,而其操作中需要有一定的技術要求,如操作手法,環境,樣本等,有時??梢姷揭恍╁e誤結果(即假陽性或假陰性)等,上海研域生物為大家解讀最常見影響ELISA檢測的因素:樣本的影響。

ELISA試劑盒

樣本的影響有哪些?

1、樣本的保存:在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、會造成假陽性;為避免上述問題,在ELISA試劑盒測定血清標本時最好能新鮮采集;如果不能立即測定,根據相應的時間保存相應的溫度,5d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。

2、樣本的時間:因為塑料試管能吸附抗原物質,所以樣本長時間放在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。一般方法是使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

3、樣本受細菌污染:因菌體中可能會含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,可能會產生非特異性顯色而干擾測定結果。

4、樣本的凝固:樣本凝固不全。在實驗中,有的時候心急為了爭取時間快速檢測,ELISA試劑盒在血液還未開始凝固的時候就強行離心分離血清,導致血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

5、樣本溶血:溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以完全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。

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